Tamizaje de infecciones por virus Epstein Barr en muestras de sangre mediante el uso de una PCR en tiempo real previo a la cuantificación de la carga viral / Screening for Epstein Barr virus infections in blood samples using real-time PCR previous to viral load quantification

El desorden linfoproliferativo postrasplante es una de las complicaciones más importantes producidas por el virus Epstein Barr (EBV) en pacientes trasplantados de órganos sólidos y de médula ósea ya que afecta la sobrevida del paciente y del injerto. En estos pacientes se han reportado altos niveles de carga viral en sangre periférica que preceden al desarrollo del desorden linfoproliferativo postrasplante. Por esto el monitoreo de la carga viral (CV) permite detectar pacientes en riesgo a desarrollar esta patología para iniciar una terapia preventiva. El objetivo de este trabajo fue desarrollar una técnica de PCR en tiempo real cualitativa (RT PCR) que permitiera ser utilizada como prueba de tamizaje previo a la determinación de CV EBV. De esta manera se podrían minimizar el costo que implicaría la utilización de un método cuantitativo comercial para todas las muestras que ingresaran al monitoreo viral. Teniendo en cuenta el desempeño de la RT PCR desarrollada, se estableció Ct ≤ 37 como valor límite para evitar amplificación inespecífica y seleccionar las muestras candidatas a la determinación de CV EBV. Dicho punto de corte presentó una sensibilidad diagnóstica relativa de 80%, una especificidad diagnóstica relativa de 85%, un valor predictivo positivo (VPP) de 53% y un valor predictivo negativo (VPN) de 95%. Para ello se consideró que valores de CV EBV< 4000 copias/ml sangre eran bajas o no presentaban riesgo de desarrollar complicaciones. El límite de detección LoD 95% fue de 280 copias de EBV/ml sangre (66 ­ 1184, IC 95%). Esta técnica demostró tener una buena performance analítica, ser de fácil implementación y el punto de corte seleccionado nos permitió realizar un buen tamizaje de muestras de pacientes trasplantados que resultaban ser candidatas a la determinación de CV, con la consiguiente disminución de costos (AU)

Post-transplant lymphoproliferative disorder is one of the main complications caused by the Epstein Barr virus (EBV) in solidorgan and bone-marrow transplantation patients affecting survival of both the patient and the graft. High levels of viral load (VL) in peripheral blood preceding the development of posttransplant lymphoproliferative disorder have been reported in these patients. Therefore, VL monitoring allows detection of patients who are at risk of developing this disease to start preventive treatment. The aim of this study was to develop a qualitative real-time PCR technique to use as an early screening test to determine EBV VL. This test may minimize costs related to the use of a commercial quantitative method for all the samples that enter for viral screening. Considering the performance of the RT PCR method developed, a Ct ≤ 37 was established as the cut-off limit to avoid unspecific amplification and select the samples that are candidates for EBV VL determination. This cut-off point had a relative diagnostic sensitivity of 80%, a relative diagnostic specificity of 85%, a positive predictive value (PPV) of 53% and a negative predictive value (NPV) of 95%. Thus, an EBV VL< 4000 copies/ml blood was considered to be low and not to be a risk for developing complications. The 95% limit of detection was 280 copies of EBV/ml blood (66­1184, 95%CI). The technique showed to be of good analytical performance and easy implementation. The cut-off point allowed a good screening of the samples of transplanted patients to detect those who are candidates for VL determination at a lower cost (AU)

Profilaxis de enfermedad por virus de Epstein Barr en niños y adultos receptores de trasplante de órganos sólidos y de precursores hematopoyéticos / Prophylaxis against Epstein Barr disease in pediatric and adult patients undergoing solid organ and hematopoietic stem cells transplantation

Post transplant lymphoproliferative disease (PTLD) associated with EBV infection is one of the most life-threatening complications in SOT and HSCT. Risk factors for infection or reactivation of EBV in SOT are the use of greater immunosuppression, seronegative receptor and CMV infection. In HSCT, the risk factors are related to type of transplant, HLA disparity, the greater immunosuppression, T-cell depletion and severe GVHD. There is no scientific evidence to support the use of specific therapy for prophylaxis of EBV infection. Prophylaxis recommendations focus on avoid exposure of transplant recipients to sources of virus, through hygiene practices such as hand washing (A3), avoid sharing utensils (B3) and avoid contact with potentially infected secretions (respiratory or saliva) (A2). For PTLD prevention, the recommendation is regular EBV viral load monitoring by rtPCR. In SOT with logarithmic rising of EBV loads, it is recommended to reduce immunosuppression and periodically perform exams to diagnose PTLD. In HSCT, it is recommended to reduce immunosuppression whenever possible, and use rituximab according to speciic protocol. Acyclovir or gancyclovir have not proven to be of any eficacy in PTLD prophylaxis in SOT (C3) or HSCT (D2), so their administration as preemptive therapy is no recommended.

El síndrome linfoproliferativo (SLP) asociado a VEB constituye una grave complicación en TOS y en TPH. Los factores de riesgo de infección o reactivación de VEB en TOS son el uso de mayor inmunosupresión, la seronegatividad del receptor previa al trasplante y la infección por CMV. En TPH se consideran factores de riesgo el tipo de trasplante, disparidad HLA, mayor inmunosupresión, depleción linfocitaria y enfermedad injerto contra hospedero (EICH) grave. No hay evidencia cientíica que apoye el uso de medidas especíicas de proilaxis en prevención de infección por VEB. Se recomienda evitar la exposición a fuentes del virus de los candidatos a trasplantes a través de prácticas de higiene tales como lavado de manos (A3), evitar el compartir utensilios (B3) y evitar el contacto con potenciales secreciones infectadas (respiratorias o saliva) (A2). Para la prevención de SLP, se recomienda un esquema de monitoreo periódico de carga viral de VEB por RPC-TR. En el caso de TOS con cargas de VEB en ascenso logarítmico, se recomienda disminuir inmuno-supresión y buscar activa y periódicamente la aparición de SLP. En TPH, se recomienda, en lo posible, disminuir la inmunosupresión y se reserva el uso de rituximab para casos especíicos según protocolo. El uso de aciclovir o ganciclovir no han demostrado constituir medidas profilácticas efectivas en TOS (C3) ni en TPH (D2), no siendo recomendada su administración en esquemas de terapia anticipada.